佐 劑
一、佐劑的定義
免疫佐劑(immunoadjuvant):是一類非特異性免疫增強(qiáng)劑,先于抗原或與抗原混合同時注入動物體內(nèi),能非特異性地增強(qiáng)機(jī)體對該抗原的免疫應(yīng)答或改變免疫應(yīng)答類型的物質(zhì),簡稱佐劑(adjuvant)。佐劑廣泛應(yīng)用于人工主動免疫和疫苗研制中,通過加入佐劑可以減少抗原用量和接種次數(shù)。
二、佐劑的作用
免疫佐劑能使非特異性加強(qiáng)或修飾與其共同注入體內(nèi)的抗原的免疫應(yīng)答,與僅用抗原免疫相比,使用佐劑能增大抗體產(chǎn)量,許多機(jī)制能夠參與到佐劑介導(dǎo)的放大效應(yīng)中,佐劑的作用機(jī)制有:① 刺激先天性免疫應(yīng)答,有助于抗原特異性B細(xì)胞和T細(xì)胞的活化;② 在接種部位形成抗原儲存庫,使抗原緩慢釋放,延長抗原在局部組織內(nèi)的滯留時間,使抗原與免疫細(xì)胞較長時間接觸并激發(fā)對抗原的應(yīng)答;③ 增加抗原表面積,提高抗原的免疫原性,輔助抗原暴露并將能刺激特異性免疫應(yīng)答的抗原表位提呈給免疫細(xì)胞;④ 促進(jìn)局部的炎癥反應(yīng),增強(qiáng)吞噬細(xì)胞的活性,促進(jìn)免疫細(xì)胞的增值和分化,誘導(dǎo)和促進(jìn)細(xì)胞因子的分泌。⑤增強(qiáng)抗原的免疫原性,使無免疫原性或僅有微弱免疫原性的物質(zhì)變成有效的免疫原;⑥增強(qiáng)機(jī)體對抗原刺激的反應(yīng)性,提高初次免疫應(yīng)答和再次免疫應(yīng)答所產(chǎn)生的的抗體水平;⑦改變抗體的產(chǎn)生類型,使由產(chǎn)生IgM轉(zhuǎn)變?yōu)楫a(chǎn)生IgG;⑧誘導(dǎo)遲發(fā)型反應(yīng),增強(qiáng)機(jī)體的細(xì)胞免疫應(yīng)答。
三、佐劑的選擇
(1)與單獨(dú)使用抗原相比,佐劑與抗原聯(lián)用能刺激機(jī)體產(chǎn)生較強(qiáng)的免疫反應(yīng)。
(2)能夠激活強(qiáng)的體液和T細(xì)胞免疫應(yīng)答。
(3)能夠遞送更好的免疫記憶或長期免疫。
(4)在寬范圍的時間、儲存、溫度和pH下質(zhì)量保持穩(wěn)定。并且易于處理和儲存。
(5)安全無毒性:不含雜質(zhì)或有害物質(zhì),通過肌肉、皮下、靜脈、腹腔等各種途徑進(jìn)入動物體后無毒副作用,產(chǎn)品安全有效。
(6)生物相容性好:佐劑應(yīng)具有良好的生物相容性,不會引起過敏或其他不良反應(yīng)。
(7)價格低廉。
(8)使用方便。
(9)批間差異小。
四、佐劑的種類
佐劑的種類有很多,一般可分為以下幾類:①無機(jī)佐劑:如氫氧化鋁、明礬等。②有機(jī)佐劑:如分枝桿菌、短小棒狀桿菌、百日咳桿菌、某些細(xì)胞因子等。③合成佐劑:包括人工合成的雙鏈多聚核苷酸,如雙鏈多聚肌苷酸和雙鏈多聚腺苷酸等。④油劑:如弗氏佐劑、礦物油、植物油等。⑤藥物類佐劑及一些新型佐劑。
五、佐劑產(chǎn)品推薦
在所有的佐劑中,油包水乳劑是認(rèn)識和使用廣泛的佐劑,是由Freund先研制出來的,廣泛地用于與抗原聯(lián)合使用以刺激高滴度抗血清的產(chǎn)生。弗氏佐劑(Freunds Adjuvant)是目前動物實(shí)驗(yàn)中常用的油包水免疫佐劑之一,常用于動物免疫制備抗體。分為不完全弗氏佐劑(IFA)和完全弗氏佐劑(CFA),弗氏完全佐劑由礦物油、乳化劑和結(jié)核分枝桿菌組成,弗氏不完全佐劑與弗氏完全佐劑一樣,只是不含有結(jié)核分枝桿菌成分。弗氏佐劑在應(yīng)用過程中,可導(dǎo)致肉芽腫、無菌性膿腫以及潰瘍的產(chǎn)生,弗氏完全佐劑增強(qiáng)免疫反應(yīng)的能力相對不完全佐劑更強(qiáng),所以在大多數(shù)實(shí)驗(yàn)方案中,只在初次免疫時使用完全弗氏佐劑(CFA),隨后的接種則使用不完全弗氏佐劑(IFA)。
洛陽佰盛生物技術(shù)有限公司自主研發(fā)的佐劑系列產(chǎn)品:(乳化型)快速不完全免疫佐劑、(乳化型)快速完全免疫佐劑、(乳化型)快速免疫佐劑套裝、弗氏不完全免疫佐劑(加強(qiáng)型)、弗氏完全免疫佐劑(加強(qiáng)型)、小鼠單抗腹水制備專用佐劑套裝、弗氏免疫佐劑套裝(加強(qiáng)型),這些佐劑產(chǎn)品具有穩(wěn)定性高、無毒副作用、批間差異小、生物相容性好、使用方便、價格低廉等優(yōu)勢,被廣大客戶認(rèn)可和青睞。特別適合單抗研發(fā)用小鼠的免疫以及兔子、山羊、豚鼠等多克隆抗血清的制備。
六、佐劑使用方法
在免疫動物前,先將佐劑與抗原按一定比例混合,制備成“油包水”乳狀液。可溶性抗原和佐劑在乳化過程中,含有抗原的小水滴被油所捕獲,在非常黏的乳劑中形成顆粒,傳統(tǒng)的乳化方法有研磨法、注射器混合法、超聲法。這些方法不僅抗原損耗大、用時長,而且乳化過程費(fèi)力不易操作。為解決這些難題,洛陽佰盛生物技術(shù)有限公司研發(fā)出了一種簡單高效的乳化方法,彌補(bǔ)了傳統(tǒng)乳化方法的各種不足。
采用洛陽佰盛生物技術(shù)有限公司自主研發(fā)的手持移液器式佐劑乳化器進(jìn)行乳化,乳化過程操作簡單、方便快捷、安全性高、用時少,幾分鐘就可乳化完全,且抗原幾乎無損耗。乳化器如下圖:
乳化具體操作方法有2種:(1)將佐劑先加入乳化管,然后加少部分抗原攪拌乳化幾下后再加抗原繼續(xù)乳化,直到抗原加完再乳化幾分鐘即可。(2)抗原和佐劑加入乳化管,稍等抗原會沉入底部和佐劑分層,用攪拌器自上而下慢慢攪拌佐劑入抗原層,慢慢下移這時會發(fā)現(xiàn)混合液很快乳白越來越粘,幾分鐘就可完成。
乳化具體操作方法有2種:(1)將佐劑先加入乳化管,然后加少部分抗原攪拌乳化幾下后再加抗原繼續(xù)乳化,直到抗原加完再乳化幾分鐘即可。(2)抗原和佐劑加入乳化管,稍等抗原會沉入底部和佐劑分層,用攪拌器自上而下慢慢攪拌佐劑入抗原層,慢慢下移這時會發(fā)現(xiàn)混合液很快乳白越來越粘,幾分鐘就可完成。
乳化完成后,將一滴乳劑滴入水中,若保持完整不分散,成滴狀浮于水面,則為乳化完全,為合格的油包水劑。各成分在乳化后不會分散,在運(yùn)用到宿主組織后,才能發(fā)揮抗原倉庫的作用。下圖是我公司制備的佐劑與抗原乳化完成效果
實(shí)驗(yàn)表明我公司制備的佐劑較好的使用比例是30-50%。接近30%乳化粘度增加,接近50%乳化粘度減小。因此建議夏季使用低濃度冬季使用高濃度乳化;這樣既能得到很好的免疫效果也能減少注射時帶來的阻力困難。
七、佐劑使用注意事項(xiàng)
(1) 用于生產(chǎn)抗血清的佐劑進(jìn)入機(jī)體組織后會引起非常強(qiáng)的炎癥反應(yīng),因此在使用這些試劑時需要佩戴手套。
(2) 佐劑是以無菌形式出售的,因此操作過程盡量清潔,佐劑一旦污染,應(yīng)丟棄。
(3) 過量佐劑可導(dǎo)致免疫抑制,從而引起抗體產(chǎn)出低,因此,佐劑使用量應(yīng)為或
接近公司建議的劑量。
(4) 對于多肽抗原或其他免疫原性較弱的抗原,可將它們與一輔助蛋白共價偶聯(lián),比如BSA、OVA,然后再與佐劑混合。
(5) 高滴度的抗體通常經(jīng)低劑量多次抗原免疫后產(chǎn)生,而非一次大劑量免疫。
八、公司介紹
洛陽佰盛生物技術(shù)有限公司位于十三朝古都、牡丹花城、中國歷史文化名城洛陽市。主要從事生物診斷技術(shù)與材料的研發(fā)、技術(shù)服務(wù)與技術(shù)轉(zhuǎn)讓;相關(guān)技術(shù)與材料的應(yīng)用范圍涵蓋食品安全檢測、動物疾病診斷、人類疾病診斷、抗體制備、細(xì)胞培養(yǎng)、疫情防控及生命科學(xué)儀器等??蛻糁饕ù髮W(xué)(食品科學(xué)院系、生物技術(shù)院系、醫(yī)學(xué)院系)、科研機(jī)構(gòu)、食品安全診斷試劑公司、動物疾病診斷試劑公司、人類疾病診斷試劑公司。做好基礎(chǔ)研發(fā),助力祖國科研是我們的主要目標(biāo)。目前公司擁有或授權(quán)使用的商標(biāo)有BIOABLAB\ABLAB。